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接触式化学发光成像仪

品牌 货号 规格 价格
E-Blot E-BLOT XLi 350000 元
E-Blot
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E-Blot
E-Blot

背景介绍

Western Blot:蛋白免疫印迹,是将PAGE电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,固相载体膜以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术现已广泛应用于分子生物学、生物化学和免疫遗传学中。

Western Blot显色的方法主要有以下几种:

放射性自显影

底物化学发光ECL

底物荧光ECF

底物DAB呈色

最常用,文献里最多,也是大家最熟悉的就是底物化学发光ECL。原理是二抗用HRP标记:反应底物为过氧化物+鲁米诺,如遇到HRP,即发光,采集该发光信号,如暗盒压胶片法,以及各种化学发光采集成像系统仪器。

Western blot 常用的几种成像方法及优劣势如下:
 

  成像方法优势劣势
直接显色法DAB显色1.操作简单
2.无需暗房
3.无需成像设备
4.成本低
1.灵敏度低,低丰度蛋白无法检测
2.定量范围窄,只有1.5OD,表达差异大的蛋白无法准确定量
化学发光法暗房压片1.压片过程没有光损失,绝对灵敏度最高,可以实现极微弱信号的成像
2.无需购置设备
1.需要一个独立的暗房             
2.定量范围窄,只有1.8OD,表达差异大的蛋白无法准确定量
3.需要胶片、显影液定影液等耗材                          
冷CCD成像1.定量范围高,高达4.8OD,表达量差异大的蛋白可以准确定量
2.检测灵敏度高
1.成像过程有大量的光损失,达不到压片的灵敏度,非常低丰度的蛋白检测不到  
2.需要购置冷 CCD 成像设备、维护成本极高                        
荧光法RGB可见荧光1.可以实现多重检测1.Western Blot膜本身的荧光背景非常高,导致成像灵敏度非常低,低丰度蛋白检测不到
2.操作过程需要在避光的环境下进行
3.荧光抗体种类不够多且成本高
4.多重检测需要做大量的实验条件优化
5.需要特殊的试剂
6.荧光成像设备成本高
近红外荧光1.可以实现多重检测 
2.相对于可见荧光背景低
1.Western Blot膜本身的荧光背景导致成像灵敏度不够,低丰度蛋白检测不到   
2.操作过程需要在避光的环境下进行   
3.荧光抗体种类不够多且成本高
4.多重检测需要做大量的实验条件优化
5.需要特殊的试剂
6.近红外荧光成像设备成本非常高

在各种成像方法中,冷CCD化学发光成像由于具有操作简单、灵敏度高、定量范围宽等优势,成为了最受欢迎的成像方法,超过99%的科研人员再使用。

但是,随着科研的不断深入,科研人员反应Western blot也越来越难做,科学家在Western bot方面面临的难题具体表现在:

1.高丰度表达的蛋白都被做完了,剩下的尽是低丰度表达的蛋白,需要更加灵敏的成像技术。

2.容易获取的样品都被做完了,剩下的尽是不容易获取的样品,一份样品要做多个实验,也是需要更加灵敏的成像技术,且要求实验尽量要一次能做成,没有样品用来做大量的条件优化。

3.蛋白表达差异大的都被做掉了,剩下的尽是些蛋白表达差异不大,需要能准确定量的成像技术。

虽然冷 CCD 化学发光成像方法有多种优势,被绝大多数人使用,但是由于其本身的技术限制,在面临超低丰度蛋白、稀有样品和表达差异不大的样品时就显得无能为力了,这些随着科研逐步深入所带来的难题急需新的技术出现来解决。
这些技术限制包括:

1.冷CCD成像仪器所用的芯片本身太小,大多只有 1 英寸或者更小,信号获取的能力远远不够,导致微弱信号不能被采集到。

2.冷CCD成像仪器成像芯片本身的单个像素尺寸太小,边长一般在3-6um之间,像素太小导致芯片本身储存信号的能力太小,导致信号极易过度曝光,无法准确定量。

3.冷CCD成像Western blot膜离CCD距离太远,导致绝大部分的光信号传输过程中直接损失掉了,并未到达CCD感光芯片,进一步降低信号采集的能力。

4.冷CCD成像需要前面加一个镜头才能实现成像,镜头内部都有一系列的透镜组,这些透镜组也会将本就非常微弱的化学发光信号阻挡掉一大半。

5.冷CCD成像所需成像时间太长,CCD本身的噪音随着时间的延长会随之积累,弱信号会被这些噪音所掩盖掉以至于不能成像。

eBlot接触式成像技术,是成像领域的革命性突破。这项革命性创新的技术克服了现有技术在成像灵敏度、定量范围、成像速度和仪器体积大等诸多瓶颈,实现了Western Blot成像技术新的飞跃。

产品概述

1.E-Blot采用超大尺寸感光芯片,让Western Blot化学发光成像进入新时代。不同于传统的暗室压片,不同于常用的制冷CCD图像采集,E-Blot让样品和感光芯片亲密接触,兼顾光学胶片的高灵敏以及CCD相机的方便性。

2.E-Blot有超宽的动态采集范围,可以对弱信号、强信号同时捕捉,整个过程非常优雅。

3.没有长时间的等待,没有各种条件摸索,眨眼间几秒时间就能得到真实的数据。

4.E-Blot尺寸比A4纸还小,裸机不到1kg。获得德国红点设计奖,型于外而慧于中。

5.Touch viewer操作、分析软件能够便捷的进行图像采集、分析等工作,非常便捷。

产品参数

成像面积

15cm*11cm

预冷

无需

像素融合

无需

A/D动态范围 

16bit(真实)

满阱电子容量

百万级e-

像素融合

无需

采集时间

1秒-60秒

曝光模式

信号累计

拍摄模式 

手动/自动

光源控制

化学发光、落射白光

设备体积

25cm(长)*12cm(宽)*5cm(高)

系统净重

650g

连接方式

RJ45


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