Frequently Asked Questions（ASQ）
在此页面上，您可以查阅常见问题的答案。 找不到您要的答案？ 请与我们联系，我们将为您提供帮助！
常见问题分类如下：
1. 有关ROKEPIE冷藏存储液应用的问题
2. 产品特征
3. 有关冷藏存储结果的问题
4 使用安全的问题
5. 储存和保质期
6. ROKEPIE的用法
有关ROKEPIE冷藏存储液应用的问题
Q1.ROKEPIE®可以用于悬浮细胞存储吗？
A1.是的，它可以。在胰蛋白酶消化后，将粘附的细胞系立即储存在富含ROKEPIE®的培养基中的实验已成功在2-8°C下储存。这些细胞在储存过程中保持分离状态，可以直接从冰箱中取出来接种到6孔板中。
Q2.我的细胞应使用哪种稀释比例来加ROKEPIE®？
A2.我们建议您在所选择的细胞系上以至少三种浓度（例如1：20、1：50、1：100）测试ROKEPIE®。 我们发现某些细胞系与其他细胞系相比，在2-8°C下需要7天的存储时间需要更少的保护，也就是说，有些细胞比较“耐冷”。
Q3.使用冷藏和ROKEPIE®是否会永久改变细胞？
A3. ROKEPIE®对细胞表观遗传学或分化的影响尚不清楚。但是，ROKEPIE®并非旨在主动更改任何这些特征。这就是我们建议用户在所选细胞系上测试细胞的原因，每种细胞系在细胞行为方面的关键变化可能会有所不同。
Q4.在我的日常过程中使用ROKEPIE®如何影响生产过程？
A4.ROKEPIE®可以通过以下方式改变您的生产过程：
-更改质量控制的时间，例如 延迟分析。
-增加过程中关键步骤的时间窗口，例如胰蛋白酶消化，接种，可增加批次大小。
Q5.ROKEPIE®是否已在任何人类原代细胞上进行过测试？
A5.是的，我们已经对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）进行了测试。 这些细胞成功地保存在96孔板中至少3天。
Q6.ROKEPIE®或2-8°C储存是否会影响干细胞分化？
A6.ROKEPIE®在方便干细胞2-8°C储存后，对干细胞分化的结果尚不明确。
Q7.您对任何类型的干细胞都有经验吗？
A7.是的，Guido Krenning博士（格罗宁根大学医学中心）已对人脂肪来源的基质细胞（hADSC）进行了ROKEPIE®测试。ROKEPIE®和液氮的保存效果一样好，但是长期保存的测试尚未完成。
Q8.运输时，容器的移动会破坏细胞层吗？
A8.在细胞培养瓶中运输细胞时，培养基的运动将对单层细胞产生压力。一种解决方案是用细胞培养基填充烧瓶，使空气不存在。目前，我们正在研究在（thermos）可逆水凝胶中使用ROKEPIE®的方法，该水凝胶的凝结温度为4°C，在37°C时变为液体。
Q9.ROKEPIE®可以使用任何培养基吗？
A9.ROKEPIE®可以与DMEM或Ham's F12等常规培养基一起使用。ROKEPIE®还已经在特定的无血清培养基中进行了测试，其中含有适合该培养基的细胞。我们还对在含有血清的培养基中培养但储存于无血清培养基中的细胞进行了测试。这些细胞也受到ROKEPIE®的保护。
产品特征
Q10.ROKEPIE®是否包含任何动物成分？
A10.不，ROKEPIE®不是源自动物，也不包含任何动物成分。
Q11.如果暴露时间太长，ROKEPIE®对我的细胞有毒吗？
A11.根据基于ISO法规（10993-5：2009）的初步细胞毒性研究，ROKEPIE®仅在比建议工作浓度高5倍的浓度下才显示出细胞毒性。
Q12.ROKEPIE®是否包含任何动物成分？
A12.不，ROKEPIE®不是源自动物，也不包含任何动物成分。
Q13.ROKEPIE®由什么制成？
A13.ROKEPIE®是在无热原的0.9％NaCl溶液中的完全合成且特征明确的小分子。
Q14.ROKEPIE®是否无菌并准备用于细胞培养？
A14.是。ROKEPIE®是在不含0.9％的无菌热原的NaCl中制备的，并通过0.2 µm的过滤器过滤。
Q15.ROKEPIE®的保质期是多少？
A15.冷冻干燥（冻干）的ROKEPIE，在2-8°C下保存，并避免阳光直射（因此，暗棕色小瓶），保质期约为3年。瓶上的标签上还印有保质期。将冻干的ROKEPIE溶解在原液中时，溶液的保质期约6个月。
Q16.一瓶ROKEPIE®能持续使用多长时间？
A16.当然，这取决于使用频率和每个容器中使用的体积。下表显示了可以用补充的ROKEPIE®细胞培养基处理的培养瓶/孔数。
| The number of cell culture vessels you can treat with a 2 mL vial of ROKEPIE®: |
| Dilution of ROKEPIE® used |
| 1:10 | 1:20 | 1:50 |
| No. T-25 flask | 4 (500 µL per flask) | 8 | 20 |
| No. wells on a 6-well plate (9,6 cm2) | 13 (150 µL per well) | 26 | 65 |
| No. wells on a 96-well plate | 192 (10 µL per well) | 384 | 960 |
Q17.我应该将ROKEPIE®添加到新鲜培养基中还是直接添加到我的细胞中？
A17.如果将ROKEPIE®直接添加到您的细胞中，然后在2-8°C下保存，则性能最佳。这意味着无需将ROKEPIE®添加到新鲜培养基中，然后在存储之前将其添加到细胞中。
Q18.ROKEPIE®或生长存储是否会改变细胞的功能或生长特性？
A18.在我们测试的细胞系（即HEK293和3T3-L1）中，如在2-8°C的储存时间后的生长速率（倍增时间）所指示的生长特性不受影响。
有关冷藏存储结果的问题
Q19.储存后我看到细胞死亡，这会发生吗？
A19.根据储存时间的长短，可以预期一些细胞死亡。在7天的存储时间内，为了使一批ROKEPIE®通过我们的质量检查，存储在ROKEPIE®中的早期传代HEK293细胞必须表现出>65％的生存力。
Q20.冷藏对我细胞的生长速度有何影响？
A20.已经确定了HEK293细胞和3T3-L1细胞在储存后的生长速率。与相同数量的源自连续37°C培养的活细胞相比，分别在2-8°C储存3和7天后，未观察到生长速率（倍增时间）的差异。
Q21.ROKEPIE®冷藏后如何确定细胞的活力？
A21.使用经典的活力测定方法（例如台盼蓝染色排除法）就足够了。但是，请注意，在将ROKEPIE®与对照进行比较时，不仅存活率非常重要，而且细胞总数也非常重要。
Q22.我的对照细胞与ROKEPIE®处理过的细胞一样具有活力，这怎么可能？
A22.一些细胞系对低温有很高的先天耐受性。 在2-8°C下几个小时到几天后，这可能导致存活。 ROKEPIE®旨在延长此最大存储时间。 请使用我们建议的测试Protocol来确定您所选择的细胞系在有和没有ROKEPIE®的情况下在2-8°C下的最大储存时间。
Q23.ROKEPIE®是否可以与悬浮细胞像贴壁细胞那样使用？
A23.是的，我们已经通过测试的细胞系以及从用户那里获得的信息来证实到这一点。
使用安全的问题
Q24.使用ROKEPIE®对实验人员安全吗？
A24.ROKEPIE®是仅供研究的产品，应与这些产品相关的所有必要安全预防措施一起使用。 仅在无菌环境中使用ROKEPIE®，并穿戴适当的防护措施，例如手套，面部防护用品和防护服。
存储和保质期
Q25.活率与我存储细胞的密度有关系吗？
A25.储存后的生存力受接种和储存细胞密度的影响。因此，我们建议在细胞处于（接近）汇合状态时存储它们。以某种方式以较低的密度存储细胞会导致存储后活力降低。ROKEPIE®仍可在较低的细胞密度下提供保护，但低温保存将导致相对较低的活细胞产量。
Q26.为什么要盖上盖子或将板密封在不透气的袋子中？
A26.细胞培养中使用的大多数缓冲液均基于碳酸氢盐缓冲液，这需要存在富含CO2的空气。这种加湿的空气存在于大多数加湿的培养箱中，因此可以在板中，盖松动的烧瓶中或在带滤盖的烧瓶中培养细胞。 冰箱中缺少富含二氧化碳的空气，这意味着碳酸氢盐缓冲液将无法完全发挥作用，从而导致pH值急剧升高（酚红将变为紫色）。另外，温度下降将导致O2和CO2的溶解度不同，也影响pH值。将容器或储存板封闭在气密袋中，可使一部分富含CO2的空气保留在碳酸氢盐缓冲液附近，从而使pH值更加稳定。也可以使用HEPES缓冲液或不依赖CO2的介质。
Q27.使用ROKEPIE®的电池的最佳存储温度是多少？
A27. ROKEPIE®的设计纯粹是为了便于在2-8°C下储存细胞。我们的产品旨在让细胞在2-8°C下储存后进入休眠状态，目前尚无法确定这种低代谢休眠状态是否也会在较高温度下发生。
Q28.我应该如何存储ROKEPIE®？
A28. ROKEPIE®应避免直射光（因此为深棕色小瓶），并应储存在2-8°C下。每种细胞类型可在2-8°C下储存的时间可能有所不同。我们建议用户自己确定其特定细胞系的最大存储时间。
Q29.细胞冷却到2-8°C需要多长时间？
A29.将容器放入冷藏室后约40分钟，细胞培养基的温度达到2-8°C（对于96孔板，Tt = 36,881 x e-0,05 t）。
Q30.ROKEPIE®不应与哪种细胞一起使用？
A30.到今天为止，我们对某一细胞系只有一个令人失望的结果。但是，此信息是由用户传递给我们的，我们无权透露这是哪条细胞系。
ROKEPIE的用法
Q31.“标准细胞培养基”是什么意思？
A31.ROKEPIE®在Dubelco改良的Eagle培养基中进行了测试，该培养基含有高葡萄糖（4.5 g / L），血清和抗生素。这种细胞培养基用于CaCo-2细胞，Skov-3，MEF，MS5，HEK293、3T3-L1，N2A细胞等。ROKEPIE®在Ham/F12K中也表现良好。这些培养基被我们视为“标准细胞培养基”。
Q32.在存储结束时如何从细胞中移除ROKEPIE®？
A32.重新加热之前，无需从介质中去除ROKEPIE®。但是，如果您确实想去除ROKEPIE®，则可以通过在存储后更换培养基来去除，并且可选用PBS洗涤。一旦细胞在冷藏后恢复了形态，就可以做到这一点。
Q33.细胞培养基中是否有任何添加剂会影响2-8°C的储存？
A33. 我们已经测试了各种浓度的添加剂，这些添加剂在2-8°C下储存后对生存能力有不利影响（血清和丙酮酸）。血清浓度为0-20％，在2-8°C下储存后，其生存能力没有改变。然而，在细胞培养基中添加丙酮酸（>500µM）会对7天的储存能力产生负面影响。因此，我们不建议在2-8°C下储存期间在细胞培养基中使用高浓度的丙酮酸。
